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本科食性特殊。它们在天黑之后才开始活动，每晚定时觅食。白翼吸血蝠和毛腿吸血蝠嗜****血，而吸血蝠则吸哺乳类血。它们降落于牛、马、鹿等寄主附近地面，然后爬上前肢到肩部或颈部，利用其上门齿和犬齿，能切开几毫米厚的皮肤，用舌舔食流出的血液。偶而也在家畜脚上吸血，它能不时迅速跳
动，以避免寄主脚的防御动作而造成伤害。由于吸血蝠唾液中的抗凝血剂，能使血液减速凝固而吸血相当顺利。每头蝙蝠每晚吸血量超过其体重的50％，一只34克的吸血蝠，每晚大概吸血18克。
吸血蝙蝠如此大量吸血，在一些地区妨碍家畜生长，也由于它传播狂犬病和其他疾病，因此它们是些令人讨厌的动物。吸血蝠偶尔也吸人血。
吸血蝠肾脏的机能极为有趣，它有显著浓缩废物的能力。吸血幅在取食后不久便排尿，迅速丧失所吸血液中的大部分水分。这样，蝙蝠在吸血后能轻装飞回栖息地，既可减少能量消耗，也可减少危险。回到栖息地后，继续消化这些脱水的血液，直到形成粪块，不再丧失水分。
世界上有许多关于吸血鬼的传说，在美洲有一些以吸血为生的蝙蝠使这个传说成为事实。当地曾流传着一种迷信的说法，认为它们都是无恶不作的巫婆，在夜里脱了皮，变成一个火球，躲在僻静的角落里，一有机会就飞到人和动物身上来吸血，真可谓残忍的“吸血鬼”！
它总是小心谨慎地飞到袭击对象跟前，在上空盘旋观察寻找下手机会。它们往往寻找熟睡的受害者，直接飞落在它的身上，而更多的是飞落在它的身旁，然后再悄悄地爬过去，爬上受害者的身上，这样不容易被发觉。
它们选择动物的裸区或毛、羽稀疏部分，如****、外阴周围、鸡冠和垂肉等裸露部分，耳朵和颈部以及脚也常被光顾，当选中合适的地方后，便迅速地用尖锐的利齿轻轻地将皮肤割破一道浅浅的小口，然后缩回来，试探一下对方是否已经熟睡，由于受害者不感到疼痛，通常不会被惊醒，仍然保持安静状态。
吸血蝙蝠在吸血时一般每秒钟吸5次，对于不同的对象会选择不同的吸血部位，例如对于牛和马，专咬背部和体侧；遇到猪，专咬腹部；如果是鸟类，则咬腿部。有人曾目击一只吸血蝙蝠用翼钩攀住一只雄鸡的腿，自己的后腿也站在地上，雄鸡走时它也跟着走，边走边吸雄鸡的血。由于当地的农场主通常在夜晚把家畜拴起来，以免走失，结果这样的家畜特别容易受到吸血蝙蝠的进攻。
在下嘴之前，吸血蝙蝠常常在它选择的位置待上几分钟，又闻又舔，再用长长的牙齿先把选择好的对象身上的毛咬掉。吸血蝙蝠从不深咬，或与受害者争斗。它们的唾液中含有一种奇特的化学物质，能够防止血液凝固，使其能顺利地吃个饱。由于被咬后血液不会凝固，有时血从伤口流出可长达8小时，动物如果被咬上很多次，也会因为失血过多而受到伤害。