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    相思子毒素的结构?:

    (1)、相思子毒素的一级结构:

    相思子毒素是一种分子质量约为63?ku~67?ku的糖蛋白,分子由A?、B两条多肽链通过1个二硫键连接而成。完整毒素在?SDS-?PAGE分析时呈一条蛋白带,经二巯基乙醇处理后,A、B两条链分离开,其中A链呈酸性,分子质量约为30?ku,与蓖麻毒素A链存在102个相同的氨基酸残基;B链呈中性,分子质量约35?ku。有关试验表明,相思子毒素两条链经二巯基乙醇还原分离开后,其活性并不丧失。

    与蓖麻毒素相似,相思子毒素也是以前体蛋白形式表达,编码前体相思子毒素的基因组不含内含子,从5′端到3′端分别编码由34个氨基酸残基组成的前导序列,250个或251个氨基酸残基组成的A链,10个氨基酸残基组成的连接肽,267个或268个氨基酸残基组成的B链。34个氨基酸残基组成的前导序列很可能包含一个信号肽,诱导前体进入内质网,进行翻译后加工,然后再转运到种子蛋白储存部位,推测信号序列的切点位于第19位的Se

    羧基端。

    相思子毒素所含的糖基主要存在于B链上,糖的类型为甘露糖和N-乙酰葡萄糖胺,毒素经糖基修饰后,可以增加其自身结构的稳定性,防止降解,增强对极端条件的适应性。已阐明了Ab

    i

    -a?的B链的2个糖基化位点附近的氨基酸序列及糖链结构,糖肽附近的氨基酸顺序为Asp-As

    (CHO)-Gly-Th

    ,Gly-As

    (CHO)-As

    ,其序列分别类似于Rici

    -D的B链Asp94-As

    (CHO)-Gly-Th

    97,Th

    134?–As

    (CHO)-As

    136。

    (2)、相思子毒素的高级结构:

    晶体结构研究表明,相思子毒素A链分为3个折叠区域。ab

    i

    -a的A链C末端比蓖麻毒素少4个氨基酸残基。关于ab

    i

    -a及蓖麻毒素的A链折叠上的差异都有可能影响对核糖体的识别和结合。相思子毒素a的B链的整个折叠方式与蓖麻毒素相似,但它们的N末端氨基酸残基第1位~12位及几个突环(第39~45,100~106,109~118,133~139,166~170,193~204位氨基酸残基)有较大差异。Ab

    i

    -a的B链由2个区域组成,每个区域又包含4个亚区λ,α,β,γ,每一区域的主体结构是由α,β,γ组成,亚区2λ连接B链的2个区域,亚区1λ参与A,B链之间二硫键的形成,2个λ亚区间有同源性,但与其他亚区有区别,2个亚区的α,β,γ间均有同源性。除了1λ亚区,ab

    i

    -a的B链的其他亚区的氨基酸链长度与蓖麻毒素的相应亚区相同。ab

    i

    -a的1λ亚区N末端比蓖麻毒素的1λ亚区多4个氨基酸残基。Ab

    i

    -a的B链的每一个区域均包含一个疏水核,形状类似于蓖麻毒素的疏水核。早先有人提出了蓖麻毒素的B链的进化理论,认为B链的祖先是1α亚区,因为仅是1α肽链保留了所有的关键结构和功能特征,基因复制和融合产生了α?,β,γ分子,然后加上λ肽链进一步稳定了分子结构,再复制产生(α、β、γ、λ)2?结构[5-

    化学成份?:

    相思种子含相思子碱(ab

    i

    e)、相思子灵(ab

    ali

    e)、下箴刺桐碱(hypapho

    i

    e),N,N-二甲基色氨酸甲酯的甲阳离子(即下箴刺桐碱甲酯)(methyl?este

    of?N,?N-dimethylt

    yptopha

    methocatio

    )、相思豆碱(P

    ecato

    i

    e)、胆碱(choli

    e)、胡芦巴碱(t

    igo

    elli

    e)、又含相思子毒蛋白(ab

    i

    )Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,相思子凝集素Ⅰ、Ⅱ(A.P.AⅠ、Ⅱ)、蓖麻毒蛋白(

    ici

    )、相思子甾醇(ab

    ici

    )、相思子甾酮知(ab

    idi

    )、角鲨烯(squale

    e)β-香树脂醇(β-amy

    i

    )、环木菠萝烯酸(cycloa

    te

    ol)、豆甾醉(stigmaste

    ol)、β-谷甾醇(β-sitoste

    ol)、胆甾醇(choleste

    ol)、菜油甾醇(campeste

    ol)、5β-胆烷酸(5β-chola

    ic?acid)、相思子酸(ab

    ussic?acid)、槐花二醇(sopho

    adiol)、槐花二醇-22-O-乙酸酯(sopho

    adiol-22-O-acetate)、常春藤皂甙元甲酯(bede

    age

    i

    methyl?este

    )、槐花皂甙Ⅲ甲酯(kaikasapo

    i

    Ⅲ?methyl?este

    )、相思子皂醇J(ab

    isaPoge

    ol?J)、三甲基色氨酸(t

    imethylt

    yptopha

    )、相思子素(ab

    usi

    )、相思子素-2-O-芹菜糖甙(ab

    usi

    -2-O-apioside)、半乳糖(galactose)、阿拉伯糖(a

    abi

    ose)、木糖(xylose)、多糖(polysaccha

    ide)及黄酮类化合物[5]。

    种子皮中含0.6%-0.8%没食子酸(gallic?acid)、相思子甙(ab

    a

    i

    )、木糖葡萄糖基飞燕草素(xyloglucosyldel?Phi

    idi

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